色譜柱基本上是每個實驗室的一種實驗室耗材,當使用效果已經無法滿足實驗需求的時候,就需要考慮更換新的色譜柱了。
那么如何判斷更換新色譜柱的時間呢?
(1)使用壓力、分離度和峰形的混合指標來考察一根色譜柱的狀態(tài)。
壓力的測量是最容易的,通常我們確定的色譜方法要滿足以下的要求:用新柱子時柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過3000psi。有統(tǒng)計表明,超過60%的色譜柱損壞是由于壓力過高的原因。
分離度是考察色譜柱的一個非常重要的指標,只要兩個組分可以獲得基線分離,對該分析物的定量就不會有什么問題。對于對稱的高斯峰來講,1.5的分辨率即可得到基線分離;若Rs在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱的評價指標的好處在于我們可以直觀地看到相鄰的峰的分離情況。
(2)另外一個考察色譜柱質量的標準是峰形拖尾情況。
廠家測試報告的峰形都非常漂亮,但這并不代表該色譜柱分析實際樣品的情況。通常,在開發(fā)分析方法的過程中,一般會試驗幾根色譜柱,分析足夠多的實際樣品,就知道當分離變差時是什么樣的情況。